Análisis de la secuencia de un clon lipolítico derivado de una biblioteca metagenómica de suelo de bosque alto andino del parque nacional natural los nevados
Con el objetivo de caracterizar el inserto metagenómico del clon BAA 3C3 proveniente de una biblioteca metagenómica de suelo de Bosque Alto Andino del Parque Nacional Natural Los Nevados, se confirmó la actividad lipolítica del clon sobre medio LB suplementado con 1% (v/v) de Tributirina y se cuanti...
| Autor Principal: | Ruiz Gómez, Anderson |
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| Formato: | bachelorThesis |
| Publicado: |
Pontificia Universidad Javeriana
2015
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://hdl.handle.net/10554/11815 |
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| Sumario: |
Con el objetivo de caracterizar el inserto metagenómico del clon BAA 3C3 proveniente de una biblioteca metagenómica de suelo de Bosque Alto Andino del Parque Nacional Natural Los Nevados, se confirmó la actividad lipolítica del clon sobre medio LB suplementado con 1% (v/v) de Tributirina y se cuantificó la actividad lipolítica empleando la técnica de pNP esteres. Adicionalmente se secuenció el inserto metagenómico con el fin de establecer que gen(es) podría(n) estar relacionados con la actividad lipolítica y determinar cuál era el posible contexto genómico. Luego de 15 días a 6°C se observaron halos de aclaramiento alrededor de las colonias generados por la hidrolisis de la tributirina. Los resultados de pNP-esteres mostraron que la enzima lipolítica del clon tiene preferencia por ácidos grasos de cadena corta y una actividad específica de 6,97U/mg(+/- 0,141, 60°C, pH 7) en pNP-Acetato y de 1,59U/mg(+/-0,375, 60°C, pH 7) en pNP-Butirato. El análisis de la secuencia permitió establecer 5 ORFs que se encuentran asociados a: carboxilesterasa, metiltransferasa, Acil-CoA deshidrogenasa, cutinasa y un regulador transcripcional respectivamente. La clasificación del ORF 1 (Carboxilesterasa) basada en las familias descritas por Arpigny y Jaeger (1999), agrupó a la enzima codificada por el ORF 1 dentro de la familia III. Con base en los resultados se sugiere que el clon expresa una nueva esterasa termoestable, activa a pH neutro y ligeramente alcalino. |
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