Mejoramiento del medio de cultivo para producción de la lacasa recombinante POXA IB de Pleurotus ostreatus en Pichia pastoris
Las lacasas son un tipo de enzimas responsables de procesos de óxido-reducción sobre sustratos de naturaleza aromática. La obtención de estas enzimas a gran escala generalmente no es adecuada cuando se piensa en la secreción por fuentes nativas, por lo tanto, una alternativa es la expresión heterólo...
| Autor Principal: | Albarracín Pardo, Diego Armando |
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| Formato: | masterThesis |
| Publicado: |
Pontificia Universidad Javeriana
2017
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://hdl.handle.net/10554/20621 |
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| Sumario: |
Las lacasas son un tipo de enzimas responsables de procesos de óxido-reducción sobre sustratos de naturaleza aromática. La obtención de estas enzimas a gran escala generalmente no es adecuada cuando se piensa en la secreción por fuentes nativas, por lo tanto, una alternativa es la expresión heteróloga para obtener rendimientos altos y producción de enzimas en mayor concentración. En un proyecto anterior, el grupo de Biotecnología Ambiental e Industrial (GBAI), logró la expresión de la lacasa recombinante POXA IB de Pleurotos ostreatos en Ptchia pastoris bajo el control del promotor de la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogenasa (pGAP). Con el propósito de aumentar la actividad y la producción de esta enzima, en este trabajo se emprendió el mejoramiento de las condiciones del medio de cultivo mediante diseños estadísticos secuenciales, utilizando un diseño factorial de tipo Plackett-Bur/nan (DEPB) seguido de un diseño experimental One Factor (DEOF) con la consecuente comprobación del resultado final. Se estudió la estabilidad de la enzima a diferentes pHs y temperaturas y como variable respuesta o independiente se seleccionó la actividad enzimática (UL;1). Después del DEOF que permitió mejorar la concentración de extracto de levadura, se logró aumentar la actividad enzimática de 451 ± 6.46 UL;1 obtenida en el trabajo previo a 1343.52 ± 40.3 UL;1, lo que significó un incremento de aproximadamente 2.98 veces la actividad enzimática. Al determinar la estabilidad del sobrenadante concentrado se encontró que se retiene más del 90% de la actividad residual a 50°C y ~50% de la actividad residual a 70°C y que se retuvo el 60% de la actividad residual a pH 10 y el pH óptimo fue de 4, reteniendo más del 90% de la actividad enzimática residual. |
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