Caracterización fenotípica y genotípica del bacteriófago 5Q18 activo contra Escherichia coli enteropatógena multirresistente
Escherichia coli enteropatógena (ECEP) es un patotipo de E. coli relacionado con diarreas infecciosas que afectan especialmente a niños. En el Ecuador, las diarreas de tipo infecciosa representan la sexta causa de muerte. El abuso de antibióticos para tratar diferentes tipos de infecciones ha genera...
| Autor Principal: | Egas Vivero, Pablo Roberto |
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| Formato: | bachelorThesis |
| Idioma: | Spanish / Castilian |
| Publicado: |
PUCE
2017
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://repositorio.puce.edu.ec/handle/22000/12525 |
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| Sumario: |
Escherichia coli enteropatógena (ECEP) es un patotipo de E. coli relacionado con diarreas infecciosas que afectan especialmente a niños. En el Ecuador, las diarreas de tipo infecciosa representan la sexta causa de muerte. El abuso de antibióticos para tratar diferentes tipos de infecciones ha generado multirresistencia por parte de las bacterias, lo cual se ha vuelto un serio problema de salud pública. Esta situación ha causado una escases de antibióticos eficaces, por lo que, la fagoterapia resulta ser una alternativa para el tratamiento de bacterias multirresistentes en los países occidentales. El presente estudio tuvo como objetivo la caracterización fenotípica y genotípica del bacteriófago 5Q18 con actividad lítica contra ECEP multirresistente. Para lo cual se colectó muestras de agua del río Machángara con el fin de aislar un fago con actividad lítica. Una vez que se aisló el fago se lo tituló mediante el ensayo de doble agar con la cepa ECEP 14 multirresistente. La actividad lítica contra ECEP 14 se evaluó mediante la cinética de lisis del fago. Por otro lado, la caracterización morfológica del fago 5Q18 se realizó mediante microscopía de transmisión electrónica; mientras que, para la caracterización molecular se purificó el ADN del fago en base a dos metodologías: i) un protocolo modificado y ii) el kit Wizard® Genomic DNA Purification kit de Promega. Después, el ADN fue cortado con la enzima de restricción XbaI para determinar el tipo de material genético. Finalmente se realizó un ensayo de actividad in vitro con dos tratamientos y tres repeticiones para comprobar la actividad lítica del fago contra ECEP 14. Como resultados de la microscopía de transmisión electrónica se determinó que el bacteriófago 5Q18 pertenece a la familia Myoviridae del orden Caudovirales con un genoma de 20 Kb. Además se encontró que el fago tiene un amplio espectro de actividad lítica frente a miembros de la especie E. coli tanto comensal como a dos patotipos, ECEP y ECEH; en particular, contra la cepa ECEP 14 multirresistente. La actividad bactericida del fago 5Q18 sobre ECEP 14 fue más alta que el ácido láctico que se usa como preservante en la industria alimenticia. En conclusión, en base a los equipos y materiales disponibles en el país se pudo caracterizar al fago 5Q18. Además, debido a las características que presenta este fago se lo puede considerar como un agente biocontrolador de E. coli enteropatógena multirresistente, por lo que, el fago podría ser aplicado en la industria alimenticia. |
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