Expresión como proteína recombinante de dos fragmentos de alta unión a células b de la glicoproteina 350 (gp350) del virus de epstein-barr en escherichia coli
El virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp...
| Autor Principal: | Soto de León, Sara Cecilia |
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| Formato: | bachelorThesis |
| Publicado: |
Pontificia Universidad Javeriana
2015
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://hdl.handle.net/10554/11863 |
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| Sumario: |
El virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp350, la cual se une al receptor CR2 (CD21) de los linfocitos B. En este trabajo se obtuvieron como proteínas recombinantes, tres péptidos identificados como los directamente implicados en el contacto gp350-CR2. En el fragmento denominado VEBI se incluyeron dos péptidos ubicados hacia el extremo N-terminal de gp350, mientras que el fragmento II o VEBII incluye un péptido localizado cerca de la región C-terminal de dicha proteína. La expresión de estos fragmentos se realizó en Escherichia coli y luego de corroborar por secuenciación la integridad de los mismos se identificó la cepa GD1 como la cepa molde que dio lugar a las construcciones plasmídicas. Se obtuvo un 0.6% aproximadamente de proteína pura para VEBI y cerca del 9.4% para VEBII, del total de lisado bacteriano de E. coli. La proteína recombinante obtenida, que incluye los péptidos localizados hacia el extremo N-terminal, puede ser de gran ayuda para diferentes ensayos pues luego de su obtención en E. coli, su conformación estructural podría no diferir mucho de su conformación nativa. Sería necesario realizar más predicciones con la finalidad de demostrar lo anterior para VEBII pues no existe un predictor de glicosilación exclusivo para proteínas virales. Las proteínas recombinantes que incluyen los fragmentos de alta unión a células B, se lograron producir y purificar en buena cantidad, a partir de su expresión en un sistema heterólogo como lo es E. coli. |
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