Estandarización de una reacción en cadena de la polimerasa multiplex para la identificación de siete especies de importancia clínica de Candida
Introducción: la identificación de las especies de Candida ha ido evolucionando con el pasar del tiempo. El cultivo micológico es el primer paso para obtener las colonias aisladas, se lo realiza en agar Sabouraud; la prueba más utilizada es el tubo germinal, técnica que permite diferenciar las espec...
| Autor Principal: | Rosales Ríos, Christian Alejandro |
|---|---|
| Formato: | DoctoralThesis |
| Idioma: | Spanish / Castilian |
| Publicado: |
PUCE-Quito
2019
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
7498 |
| Etiquetas: |
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| Sumario: |
Introducción: la identificación de las especies de Candida ha ido evolucionando con el pasar del tiempo. El cultivo micológico es el primer paso para obtener las colonias aisladas, se lo realiza en agar Sabouraud; la prueba más utilizada es el tubo germinal, técnica que permite diferenciar las especies de Candida albicans de las no albicans, es un método rápido para observar el desarrollo de hifas; dicha metodología agrupa a todas las especies diferentes a Candida albicans en el grupo de no albicans lo que deja una gran vacío de información acerca de la determinación de la especie de esta levadura. Actualmente, las técnicas se han adaptado a las necesidades de los laboratorios por lo que se han desarrollado pruebas bioquímicas como el auxonograma y zimograma, así como agares cromogénicos que diferencian a las especies de Candida por colores. Por lo que, el objetivo de este estudio es desarrollar y estandarizar una técnica de reacción en cadena de la polimerasa multiplex para la identificación de siete especies de importancia clínica de Candida.
Metodología: en el presente estudio se emplearon cepas estandarizadas de siete diferentes especies de Candida albicans, auris, glabrata, guilliermondii krusei, parapsilosis y tropicalis; las cuales fueron cultivadas y su ADN obtenido mediante extracción por columna. Se realizó gradientes de temperatura y concentración de primers para la estandarización de la PCR multiplex que amplificó el gen ITS 1 para las especies albicans, glabrata, guilliermondii, krusei y tropicalis, el gen TopoIsomerasa II de la especie auris y la región 5.8s ADN de la especie parapsilosis. Se realizaron diluciones de ADN para determinar el límite de detección y se comparó la especificidad de primers mediante pruebas con varios ADN de diferentes especies de levaduras. |
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