Caracterización molecular de las especies de Candida almacenadas en el laboratorio de micología clínica de la Carrera de Bioquímica Clínica, Facultad de Medicina de la Pontificia Universidad Católica del Ecuador en la ciudad de Quito correspondientes al período de enero 2000 a agosto 2007
Introducción: Actualmente las técnicas fenotípicas en el laboratorio de Micología Clínica presentan muchas dificultades, ya que no se logra la identificación de género y especie haciendo necesario el desarrollo de técnicas moleculares (PCR) y sus variantes. Esta técni...
| Autor Principal: | Yánez Domínguez, Degsy Dayana |
|---|---|
| Formato: | bachelorThesis |
| Idioma: | Spanish / Castilian |
| Publicado: |
PUCE - Quito
2020
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
8703 |
| Etiquetas: |
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| Sumario: |
Introducción: Actualmente las técnicas fenotípicas en el laboratorio de Micología Clínica
presentan muchas dificultades, ya que no se logra la identificación de género y especie
haciendo necesario el desarrollo de técnicas moleculares (PCR) y sus variantes. Esta
técnica presenta varias ventajas por su rapidez en el análisis, menor riesgo de
contaminación y facilidad al manejo de la muestra. El objeto de este estudio fue comparar
las prueba molecular de las reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y métodos
convencionales para identificar las diferentes especies de Candida, incluyendo el sistema
API 20C AUX, la técnica de Dalmau y la morfogénesis en agar harina de maíz.
Materiales y métodos: El presente estudio fue de tipo observacional descriptivo para la
identificación de género y especie de 170 cepas de Candida almacenadas en el cepario del
laboratorio de Micología de la Carrera de Bioquímica Clínica-PUCE, utilizando métodos
de identificación fenotípica (prueba Dalmau, tubo germinal y Api) y genotípica, se aplicó
una PCR con ayuda de cebadores específicos para las siguientes especies: C. albicans, C.
glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis y C. auris. A las cepas
que presentaron discrepancias en la identificación genotípica y no se encontraron entre los
cebadores a usar se realizó correlación entre la técnica Dalmau y el API 20C AUX.
Resultados: Entre las 170 cepas de candidas, la más frecuente en todo el estudio fue C.
albicans 58% (99/170), seguido de C. tropicalis 25% (42/170), C. glabrata 6% (11/170),
C. guilliermondii 5% (9/170), C. parapsilosis 2% (3/170) y C. krusei 1% (1/170). C. auris
no se encontró en él estudio. Se reconocieron cepas identificadas como C. famata 1%
(2/170) y C. lusitaniae 1% (2/170) que se identificaron por el sistema API 20C AUX.
Al comparar los resultados obtenidos por el método fenotípico y el genotípico se obtuvo un
índice kappa de 0.77 entre la técnica Dalmau y la PCR, con una coincidencia del 100%
(99/99) para C. albicans, 67% (28/42) para C. tropicalis, 64% (7/11) para C. glabrata, 56%
(5/9) para C. guilliermondii. En las cepas de C. krusei y C. parapsilosis solo se logró
identificar mediante AHM y no se logró amplificar mediante PCR.
Conclusiones y recomendaciones: El agar harina de maíz + Tween 80 resulta útil para la
identificación de las especies de Candida promoviendo la morfogénesis, principalmente en
C. albicans y C. tropicalis. De acuerdo al índice kappa se obtuvo una buena concordancia
entre los métodos utilizados en la investigación sin embargo no es recomendable la
sustitución del método Dalmau por la PCR como identificación de especie, ya que se requeriría la confirmación mediante secuenciación. Se sugiere complementar este estudio
comparando otros métodos como CHROMagar, snPCR, Vitek, D1-D2 rDNA, ITS
secuenciación, y estudiar a fondo en cada una de las especies los factores de virulencia y
los mecanismos de resistencia a los antimicóticos. |
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