Evaluación de la expresión de la proteína recombinante fenilalanina hidroxilasa humana producida por Lactobacillus plantarum
La fenilcetonuria es la amioacidopatía más frecuente dentro de los errores innatos de metabolismo y consiste en la acumulación del aminoácido L-fenilalanina (Phe) en tejidos y plasma a causa de la pérdida de actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa la cual oxida la Phe a L-tirosina. La acumul...
| Autor Principal: | González Castellanos, Santiago Iaacov |
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| Formato: | Trabajo de grado |
| Publicado: |
Pontificia Universidad Javeriana
2019
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| Materias: | |
| Acceso en línea: |
http://hdl.handle.net/10554/43202 |
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| Sumario: |
La fenilcetonuria es la amioacidopatía más frecuente dentro de los errores innatos de metabolismo y consiste en la acumulación del aminoácido L-fenilalanina (Phe) en tejidos y plasma a causa de la pérdida de actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa la cual oxida la Phe a L-tirosina. La acumulación de este compuesto tiene un efecto neurotóxico y puede llegar a deteriorar la salud de quien padece la enfermedad si no es tratada a tiempo. Este trabajo de grado tuvo como objetivo evaluar a Lactobacillis plantarum como sistema de expresión de la enzima fenilalanina hidroxilasa humana, con el fin de determinar si la proteína heteróloga puede ser empleada como agente terapéutico contra la enfermedad.
Dentro de los hallazgos obtenidos en este estudio, se obtuvo que Lactobacillus plantarum es sistema de expresión que es fácilmente transformable. Sin embargo, se observaron problemas con el seguimiento de la proteína recombinante mediante el uso del reportero, proteína verde fluorescente. Por otra parte, mediante técnicas moleculares como SDS PAGE y western blot fue posible identificar la presencia de esta enzima, donde los resultados sugieren que la proteína reportera está ausente. Finalmente, midiendo la actividad enzimática del clon positivo para la enzima se pudo concluir que este clon sintetiza una proteína funcional.
Estos resultados muestran la importancia de seguir estudiando el uso de L. plantarum como sistema de expresión. Sin embargo, futuros trabajos se deben enfocar en la confirmación de la producción de la proteína, así como en nuevos reporteros que permitan seguir el proceso de producción de la proteína de una manera más eficiente. |
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